La hierba de San Juan o hipérico, descrita en las obras de Plinio y Dioscurides, ya se utilizaba en la antigüedad clásica como medicamento para el sufrimiento somático y emocional. También era un componente de la theriaca (panacea) que el médico Andrómaco le dio al emperador Nerón como antídoto universal y preventivo contra los envenenamientos. En las antiguas culturas del solsticio germánico, la hierba de San Juan jugó un papel importante; la forma y el color de sus flores recordaban al sol, y también se le consideraba como «portadora de luz». Con la cristianización, el solsticio y sus plantas se dedicaron a Juan el Bautista; la planta comienza a florecer y exhibe su mayor contenido de agente eficaz el solsticio de verano o el día de San Juan Bautista (24 de junio). En la leyenda popular, el jugo rojo de la planta simboliza la sangre del mártir Juan.
El hipérico o hierba de San Juan se ha utilizado durante mucho tiempo en el tratamiento de heridas y dolores. En la Edad Media y en el período moderno temprano, también se utilizó como psicoterapéutico y apotropaico (una sustancia que protege del mal). Fue utilizado en exorcismos, como indica su nombre Fuga daemonum (Vuelo del demonio). En 1525, Paracelso escribió sobre la hierba de San Juan: «Todo médico debe saber que Dios ha colocado un gran arcano (secreto) en la hierba, sólo para los espíritus y las locas fantasías que llevan a la gente a la desesperación. »
El origen del nombre griego de la familia, Hypericum, no está claro. Una versión dice que se deriva de «hyper eikon» («excediendo cualquier imaginación») y se refiere al gran poder curativo de la planta. Sin embargo, es más probable que esté conectado con el Titán Hyperion («el superior»), cuya unión con Theia produjo al dios del sol Helios. Helios (también conocido como Hyperion), lleva una corona de rayos y es llamado «el ilustre». El nombre de la especie «perforatum» se refiere a las flores y las hojas, que parecen haber sido perforadas con agujas.
Características botánicas del Hipérico o hierba de San Juan (Hypericum perforatum L)
En primavera, varios tallos duros, a menudo rojizos y sin pelo, crecen de 50 a 80 cm de altura a partir de un patrón ampliamente ramificado. La parte superior del tallo está ramificada y se extiende lateralmente.
Un rasgo característico que distingue a la hierba de San Juan de otras especies de Hypericum son los dos bordes longitudinales del tallo. De él crecen las hojas enteras, sin tallo, opuestas, alargadas y ovaladas, que están cubiertas de finas puntas glandulares negras.
Las flores de color amarillo dorado se encuentran en las puntas de las ramitas superiores y forman una inflorescencia címica ampliamente extendida. Los pétalos asimétricos de cinco puntas también están cubiertos de glándulas. Triturar las flores produce un jugo rojo sangre que tiñe los dedos de azul violeta. Los numerosos estambres se agrupan en tres paquetes.
H. perforatum tiene cuatro subespecies que se distinguen por la amplitud de sus sépalos. Son frecuentes las falsificaciones y confusiones con otras especies de Hypericum estrechamente relacionadas. Son reconocibles por la forma de las piezas de los tallos o mediante la realización de cromatografía en capa fina.
La hierba de San Juan o hipérico florece desde finales de junio hasta septiembre.
LAS ACTIVIDADES BIOLÓGICAS DE hipérico o hierba de San Juan, HYPERICUM PERFORATUM L.
Abstracto
Antecedentes:
La mastitis reduce la producción de leche y altera la composición de la leche. Los antibióticos se utilizan ampliamente en el tratamiento de la enfermedad. Sin embargo, este uso generalizado de antibióticos provoca tanto residuos de antibióticos en las leches como resistencia a los antibióticos desarrollada en las bacterias. Las investigaciones actuales se centran en descubrir y utilizar nuevos antibióticos contra las bacterias.
Objetivo:
El objetivo de este trabajo fue descubrir los efectos antibacterianos de los extractos de hipérico o hierba de San Juan, Hypericum perforatum L. contra los patógenos de la mastitis y sus otras actividades biológicas.
Material y métodos:
Se aplicó el ensayo de Kirby-Bauer a los extractos. La otra actividad antibacteriana fue MIC para extractos de plantas. La actividad antioxidante no enzimática se encontró usando 2,2-difenil-1-picril-hidrazil-hidrato (DPPH).
Resultados:
El extracto mostró una zona de máxima inhibición contra dos bacterias ( Staphylococci Coagulasa-negativo -33 y 37; SNC 33 y 37), y la zona fue de 17 mm. Una bacteria (SNC – 22) mostró la menor sensibilidad a una concentración de 812,5 μg / ml. Además, el extracto se probó contra el DPPH estable por su actividad antioxidante. Como resultado, el extracto mostró una fuerte actividad antioxidante. El equivalente de Trolox es 0,83 mM.
Conclusión:
El extracto de hipérico o hierba de San Juan, Hypericum perforatum tiene potencialidades antibacterianas, antioxidantes y antimutagénicas.
Introducción
La mastitis es una enfermedad compleja, que se define como la inflamación del parénquima de las glándulas mamarias y se caracteriza por cambios físicos, químicos y generalmente bacteriológicos en la leche y cambios patológicos en los tejidos glandulares (Radostits et al. , 2000). Los organismos causales generalizados de la enfermedad mamaria incluyen: Staphylococcus, Streptococcus y bacterias coliformes (McDonald, 1979). Los estafilococos coagulasa negativos (SNC) se han considerado patógenos menores de la mastitis, especialmente en comparación con patógenos importantes como Staphylococcus aureus . La razón principal de esto es que la mastitis causada por el SNC es muy leve y, por lo general, sigue siendo subclínica (Taponen et al., 2006). Sin embargo, es necesario reconsiderar la importancia de los SNC, ya que en muchos países se han convertido en los agentes causantes de mastitis más comunes (Pitkala et al. , 2004; Tenhagen et al. , 2006).
Los estudios sobre plantas medicinales están aumentando rápidamente debido a la búsqueda de nuevas sustancias activas y para la mejora en la producción de plantas o moléculas para las industrias farmacéuticas a base de hierbas (Poutaraud et al. , 2005). La Organización Mundial de la Salud informó que las plantas medicinales son la mejor fuente de medicamentos. Sin embargo, estas plantas deben ser investigadas por sus características sobresalientes, seguridad y efectos (Nascimento et al. , 2000).
Hypericum perforatum L. (hierba de San Juan o hipérico) es una planta medicinal conocida que se ha utilizado durante una década (Gadzovska-Simic, 2012). Esta planta es un representante de la familia Hypericaceae con efectos terapéuticos confirmados sobre quemaduras, hematomas, hinchazón, ansiedad, depresión leve a moderada (Luo, 2004), antidepresivo, antiviral, cicatrizante, analgésico, hepatoprotector, antioxidante y actividad antimicrobiana (Jakovljevic, 2000; Popovic, 2002; Radulovic, 2007; Spiteller, 2008). Recientemente, las propiedades antivirales y antidepresivas de Hypericum se han demostrado ampliamente (Luo, 2004). Extractos de H. perforatumse sabe que contienen compuestos de seis grupos principales de productos naturales: naftodiantronas, acilfloroglucinoles, glicósidos de flavonol, biflavonas, proantocianidinas y fenilpropanos (Nahrstedt y Butterweck 1997). Se han utilizado muchas plantas debido a sus actividades biológicas. Porque estas plantas sintetizan sustancias sekonder. No se han estudiado las actividades biológicas de los extractos de flores de hipérico Hypericum perforatum contra las bacterias de la mastitis. Además, las actividades antioxidantes de los extractos de flores de H. perforatum están menos estudiadas en comparación con sus otros impactos biológicos. En nuestro trabajo, se investigó el extracto metanólico de flor por sus efectos antibacterianos, antioxidantes no enzimáticos y antimutagénicos.
Material y métodos
Material vegetal
Las flores de hipérico Hypericum perforatum se recolectaron de diferentes lugares de Selcuk, región de Izmir, Turquía en 2014. La identificación taxonómica de la planta fue realizada por el Dr. Olcay Ceylan de la Universidad de Mugla Sitki Kocman, Turquía y se almacenó una muestra en el herbario. La identidad de estos ejemplares fue aplicada por Flora of Turkey (Davis, 1965).
Las flores se limpiaron a fondo 2-3 veces con agua destilada estéril y corriente. El material de flor verde se secó al aire. Estas flores pulverizadas en un molino disruptivo. Todas las muestras se almacenaron a temperatura ambiente. Luego, las flores se almacenaron a 4 ° C hasta que se necesitaron para el ensayo.
Extracción de plantas de hipérico o hierba de San Juán
Los materiales secos (30 g) se extrajeron con disolvente orgánico (metanol) mediante el aparato Soxhlet. Estos materiales se evaporaron. Luego, los materiales se almacenaron en botellas de esterilla. Estos viales se almacenaron refrigerados hasta su uso (100 mg / ml).
Microorganismos y cultivo
En este trabajo, los extractos de flores de hipérico, Hypericum perforatum se probaron individualmente contra la bacteria de la mastitis. Estos patógenos provienen de estudios previos por el Dr. Zafer Cantekin, Universidad Mustafa Kemal, TURQUÍA (Número de proyecto: 1101 M 0103; Número del consejo de ética: 2010 / 02-30: 12). Hemos sido utilizado dos S. aureus y cinco coagulasa negativos estafilococos (SNC) en nuestro estudio. Estos patógenos se cultivaron a 37 ° C durante 24 horas. Se utilizó el caldo Mueller – Hinton (MHA) para el cultivo de bacterias. Todas las bacterias se identificaron mediante pruebas bioquímicas tradicionales (Quinn, 1994).
Ensayo de actividad antibacteriana
En este estudio, se aplicó el ensayo Kirby-Bauer para actividades antibacterianas. Las bacterias se conservaron en placas MHA a 37 ° C (Bauer, 1966). Cultivos bacterianos ajustados a 0,5 Mc Farland. Las incubaciones de bacterias se realizaron a 37 ° C durante 24 horas. La evaluación de la actividad antibacteriana se basó en la medición del diámetro de las zonas de inhibición alrededor de los discos después de 24 horas. Hemos utilizado metanol y ampicilina (10 μg) como control en nuestro estudio. Todas las pruebas se realizaron por triplicado y se dieron los valores medios.
Ensayo de concentración mínima inhibitoria (MIC)
Las CIM de los extractos de plantas se midieron mediante un ensayo de dilución en caldo. Los valores de MIC se dieron como la concentración más baja de extractos de plantas. El ensayo de dilución en caldo se realizó de acuerdo con los estándares de CLSI (CLSI, 2003; CLSI, 2006). Hemos utilizado concentraciones finales del extracto en nuestro trabajo. Estas concentraciones fueron de 6500 μg / mL a 406.25 μg / mL (6500; 3250; 1625, 812.5 y 406.25 μg / mL).
Determinación de la actividad antioxidante no enzimática
La actividad antioxidante no enzimática se decidió mediante el uso de radicales libres DPPH. El DPPH estable se utilizó para la determinación de la actividad captadora de radicales libres del extracto de flor. Se añadió extracto (0,1 ml) a una mezcla de metanol DPPH (0,1 mM). Esta solución se incubó durante 30 minutos y después, se midió espectrofotométricamente la absorbancia de la solución. El blanco fue metanol. Hemos utilizado metanol con solución de DPPH como control (Brand-Williams, 1995). Además, se utilizó trolox como referencia. La capacidad de eliminación de radicales libres expresada en porcentaje (%) se calculó a partir de la fórmula.
Ensayo de actividad antimutagénica
Las actividades antimutagénicas de los extractos se realizaron mediante el ensayo de microsomas de Salmonella . En este estudio, se utilizaron cepas de prueba de Salmonella Typhimurium para pruebas de actividad antimutagénica. Estas bacterias fueron obtenidas de estudios previos por el Dr. BN Ames (Maron y Ames, 1983). En nuestro estudio, se utilizaron dos cepas de prueba para probar la antimutagenicidad del extracto de H. perforatum . Estas bacterias son Salmonella Typhimurium TA98 y TA100. El cálculo del porcentaje de actividad antimutagénica se realizó según Ong et al.. (1986). Se utilizó azida de sodio como control positivo. El metanol es un control negativo. Al mismo tiempo, también se establecieron un control positivo (con mutágeno pero sin extracto) y un control negativo (donde no se agregó mutágeno). La muestra de prueba se disolvió en metanol. Pero el mutágeno se disolvió en agua destilada. En nuestro estudio, las concentraciones no tóxicas de la muestra de prueba utilizada para la investigación fueron de 12500 y 25000 μg / placa. Estas concentraciones se clasificaron como no tóxicas porque mostraban un césped bien desarrollado, tamaño de colonias casi similar y ninguna diferencia estadística en el número de revertantes espontáneos en las placas de prueba y control.
Resultados
Se probaron las actividades antibacterianas de los extractos de flores contra las bacterias de la mastitis. Los resultados de este estudio se dan entabla 1. Los resultados de las zonas de inhibición se registraron como mm. Los extractos suprimieron el crecimiento de bacterias. Estas zonas de inhibición formadas contra bacterias oscilaron entre 13 y 17 mm. Los extractos de hipérico Hypericum perforatum han sido bastante efectivos contra 2 bacterias. La zona de inhibición más alta se determinó en CNS-33 y 37, y su zona fue de 17 mm. La ampicilina (10 µg) es un control positivo. La ampicilina suprimió fuertemente el crecimiento de S. aureus – 17 (tabla 1).
tabla 1
Actividades antibacterianas de los extractos de flores de hierba de San Juan, Hypericum perforatum
| Bacterias | Diámetros de la zona de inhibición (mm) | Ampicilina |
|---|---|---|
| S. aureus – 17 | 13 | 18 |
| S. aureus – 18 | dieciséis | 12 |
| SNC – 22 | dieciséis | – |
| SNC – 32 | dieciséis | 10 |
| SNC – 33 | 17 | 8 |
| SNC – 36 | dieciséis | – |
| SNC – 37 | 17 | – |
SNC: estafilococos coagulasa negativos
Tabla 2muestra las CIM de H. perforatum obtenidas por el método de dilución en caldo. CNS-22 demostró la menor susceptibilidad al extracto de metanol (812.5 μg / mL) (Tabla 2).
Tabla 2
Concentraciones mínimas inhibitorias de extractos de flores de Hypericum perforatum
| Bacterias | Concentración mínima inhibitoria (metanol; μg / mL) |
|---|---|
| S. aureus-17 | 3250 |
| S. aureus-18 | 1625 |
| SNC – 22 | 812,5 |
| SNC – 32 | 1625 |
| SNC – 33 | 1625 |
| SNC – 36 | 1625 |
| SNC – 37 | 1625 |
SNC: estafilococos coagulasa negativos
La capacidad de eliminación de radicales DPPH se utilizó para las actividades antioxidantes de los extractos de flores. Las actividades antioxidantes de los extractos de flores mostradas enTabla 3. El extracto mostró una inhibición del 32% a una concentración de extracto de 100 mg / ml. El valor equivalente de Trolox fue de 0,83 mM / g DW (Tabla 3).
Tabla 3
Capacidad de eliminación de radicales DPPH del extracto de flor de H. perforatum
| Extractos de flores | DPPH (%) | Equivalente de Trolox (mM / gDW) |
|---|---|---|
| Metanol | 32 | 0,83 |
DW: peso seco
Las capacidades antimutagénicas de las flores de H. perforatum se dan enCuadro 4 y y 5.5. En este trabajo, para determinar la actividad antimutagénica de H. perforatum , se inocularon mutágenos diagnósticos en las placas de Petri de muestra y se utilizaron dos cepas para medir esta actividad. H. perforatum extracto de la flor (25.000 g / placa) calcula una fuerte influencia inhibidora positiva para S . Typhimurium TA98 (64,6%) y S . Typhimurium TA100 (49,7%) (Cuadro 4).
Cuadro 4
Actividades antimutagénicas de los extractos de flores de H. perforatum (25000 μg / placa)
| Tratamiento | Salmonella typhimurium TA98 | Salmonella typhimurium TA100 | ||
|---|---|---|---|---|
|
|
|
|||
| Número de revertientes | % De inhibición | Número de revertientes | % De inhibición | |
| Controlar | 42 | 84 | ||
| Control negativo (metanol) | 43 | 87 | ||
| Control de pozitive (azida sódica) 113 | 113 | 161 | ||
| Extracto de H. perforatum | 40 | % 64,6 | 81 | % 49,7 |
Cuadro 5
Actividades antimutagénicas de los extractos de flores de H. perforatum (12500 μg / placa)
| Tratamiento | Salmonella typhimurium TA98 | Salmonella typhimurium TA100 | ||
|---|---|---|---|---|
|
|
||||
| Número de revertientes | % De inhibición | Número de revertientes | % De inhibición | |
| Controlar | 42 | 84 | ||
| Control negativo (metanol) | 43 | 87 | ||
| Control de pozitive (azida sódica) | 113 | 161 | ||
| Extracto de H. perforatum | 47 | % 58,4 | 98 | % 39,1 |
Un impacto moderado inhibidora (39%) para S . Typhimurium TA 100 se determinó a partir del extracto de flor de H. perforatum (12500 μg / placa). Considerando H. perforatum extracto de la flor (12.500 g / placa) mostró un fuerte efecto inhibidor (58%) para S . Typhimurium TA98 (Cuadro 5).
Discusión
Los aceites y extractos vegetales se han utilizado para una amplia variedad de propósitos durante muchos miles de años (Jones, 1996). Los científicos demostraron que las plantas medicinales tienen fuentes ricas en compuestos biológicamente activos. Muchos de estos materiales se han utilizado como compuestos para mejorar nuevos medicamentos (Palombo, 2011). Este estudio confirma que las flores de H. perforatum poseen actividades antibacterianas, antioxidantes y antimutagénicas.
En el presente estudio, los extractos de metanol se probaron contra patógenos de mastitis. Estos resultados se compararon con ampicilina. Las flores de H. perforatum demostraron un bajo impacto contra una bacteria (tabla 1). Meral y Karabay (2002) informaron resultados paralelos. Este informe respalda los resultados de nuestro estudio. En nuestro trabajo, los extractos de metanol resultaron altamente efectivos para seis bacterias, excepto S. aureus – 17 (tabla 1). El extracto de hierba de San Juan o hipérico, Hypericum demostró actividad bactericida in vitro contra una serie de bacterias Gram positivas y Gram negativas, incluidas Staphylococcus aureus, Proteus vulgaris, Escherichia coli y Pseudomonas aeruginosa (Barbagallo y Chisari, 1987). Keleş y col. , (2001) encontraron que el extracto de H. perforatum tiene un amplio espectro de actividad inhibidora. Además, el extracto de H. perforatum mostró un efecto inhibidor de 16 y 14 mm contra Staphylococcus aureus, Streptococcus agalactiae , respectivamente (Keleş et al. , 2001). El informe respalda los resultados obtenidos de nuestro estudio. Rancioet al. , (2005) declaró que el extracto de H. perforatum ha demostrado inhibición contra S. aureus y esta zona es de 5 mm. Los resultados de nuestro estudio son mejores que los de Rancic (2005). No es sorprendente que existan diferencias en los efectos antibacterianos de los grupos de plantas, debido a diferencias fitoquímicas entre especies.
La sensibilidad más baja a los extractos de metanol determinada en CNS-22 (Tabla 2). Dordevic y col. , (2013) informaron que el valor de concentración inhibitoria mínima (MIC) de los aceites esenciales de H. annulatum y H. elegans contra S. aureus se encontró en 3,13 mg / ml. En otro estudio, el aceite esencial aislado de las partes aéreas de H. rumeliacum exhibió actividades moderadas contra todas las bacterias probadas (S. aureus, S. epidermidis, E. coli, Enterobacter cloacae, Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa) , con una CIM de 3,80-17,20 mg / ml (Couladis et al. , 2003). En nuestro trabajo, el valor de CIM más bajo del extracto de flor se determinó en 812,5 jg / mL. Nuestros hallazgos son mejores que los resultados de MIC de otros científicos (Dordevic et al., 2013; Couladis y col. , 2003). Aligiannis y col. (2001) informaron que los materiales vegetales pudieron clasificarse en función de los resultados de MIC. Los extractos de metanol de H. perforatum pueden aceptarse como inhibidores bajos contra las bacterias de la mastitis. Saroglou y col. , (2007) informó que el valor de CMI de H. perforatum fue de 12,5 jg / ml para S. aureus . La razón de esto puede ser la composición de la planta. El contenido y la composición de los aceites esenciales pueden verse muy afectados por varios parámetros, incluida la variación estacional (Guedes et al. , 2004), el ciclo fenológico (Schwob et al. , 2004) y la distribución geográfica.
Cai et al., (2004) informaron que la capacidad de las plantas de captar radicales libres es responsable de su impacto curativo contra algunas enfermedades. La actividad antioxidante de H. perforatum se da enTabla 3. El extracto de flor fue inhibido por radicales libres y la inhibición se determinó como 32% a una concentración de extracto de 100 mg / mL. El valor equivalente de Trolox fue 0,83 mM / g DW. Wojdylo y col. , (2007) informaron que la capacidad antioxidante de H. perforatum se encontró en 82,3 μM trolox / 100 g dw. Estos resultados de Wojdylo et al. , (2007) no fueron tan buenos como nuestros resultados. Vardapetyan et al., (2014) informaron que la mayor capacidad de captación de radicales se encontró en el extracto etanólico de hojas de H. perforatum . Previamente se informaron variaciones en la composición de aceites esenciales de varias especies del género Hypericum , dependiendo de factores genéticos (Petrakis et al., 2005), distribución geográfica y factores ambientales (Couladis et al. , 2001; Smelcerovic et al. , 2007), ontogenia (Schwob et al. , 2004; Nogueira et al. , 2001) y órgano vegetal (Bertoli et al. , 2003).
En este trabajo, H. perforatum extracto de la flor (25.000 g / placa) demostró una fuerte inhibición positivo para Salmonella Typhimurium TA98 (64,6%) y S . Typhimurium TA100 (49,7%) (Cuadro 4). Peron et al., (2013) demostraron que esta planta no tenía potencial mutagénico en tratamientos subcrónicos por sonda (0.3, 3.0 y 30.0 mg / mL). Ndhlala y col. , (2011) determinaron que H. aethiopicum no era mutagénico mediante la prueba de Ames con Salmonella Typhimurium. Los informes respaldan los resultados obtenidos de este trabajo. En este estudio, H. perforatum extracto de la flor (12.500 g / placa) se le dio un impacto inhibidora positiva contra S . Typhimurium TA98 (58%). Además, esta dosis se mostró efecto inhibidor moderado para S . Typhimurium TA100 (39%) (Cuadro 5). El extracto de Hypericum demostró una actividad antimutagénica sobre la reparación del ADN en Escherichia coli (Vukovic-Gacic y Simic, 1993). El informe respalda nuestros resultados obtenidos del estudio.
Conclusión
En conclusión, se determinó que el extracto metanólico de H. perforatum probado en el estudio tiene actividades antibacterianas potenciales contra S. aureus y patógenos del SNC aislados de mastitis subclínica de las vacas. Nuestros hallazgos recomiendan que H. perforatum tiene una importante actividad antibacteriana. Creemos que podría resultar muy beneficioso en el campo de los nuevos agentes antibacterianos de origen vegetal. Además, los extractos de metanol de la planta tienen menos importancia como actividades antioxidantes. Además, esta planta mostró propiedades antimutagénicas y es de alta importancia. El estudio sugiere que Hypericum perforatum, debido a su propiedad antimutagénica, puede ser beneficioso para la prevención del cáncer. Se requiere más investigación para determinar los mejores agentes antioxidantes, antimutagénicos y antibacterianos.
Agradecimientos
Los autores informan que no tienen ningún conflicto de intereses. La identificación de esta planta fue realizada por el Dr. Olcay Ceylan (Universidad de Mugla Sitki Kocman, Turquía). Los autores le agradecen.